【目的】探究秸秆分层还田耦合腐解菌剂对土壤有机碳转化、碳代谢相关酶活性、微生物群落结构和水稻产量的影响,以期为中低产黄泥田有机培肥和水稻产能提升提供理论依据。【方法】试验设置8个处理,即不施肥(CK),常规施肥(NPK),常规施肥下秸秆0 cm、0-8 cm和8-18 cm分层还田(NPKSL0、NPKSL0-8和NPKSL8-18),常规施肥下秸秆0 cm、0-8 cm和8-18 cm分层还田耦合腐解菌剂(NPKSML0、NPKSML0-8和NPKSML8-18)。分析成熟期不同处理土壤各有机碳组分、碳代谢相关酶活性、微生物群落结构、水稻产量及其构成因子差异特征,并对影响水稻产量和土壤有机碳含量的主导环境因子进行解析。【结果】与NPK和NPKSL0-8处理相比,秸秆深施(NPKSL8-18)处理显著提高土壤易氧化有机碳、微生物生物量碳、颗粒有机碳含量、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶活性以及酸杆菌门(Acidobacteriota)和子囊菌门(Ascomycota)相对丰度。与单一秸秆还田各处理相比,秸秆还田耦合腐解菌剂显著提高0-8 cm和8-18 cm土壤有机碳、易氧化有机碳、颗粒有机碳、矿物结合态有机碳含量及β-葡萄糖苷酶活性。同时,NPKSML8-18处理绿弯菌门(Chloroflexi)相对丰度最高,但罗兹菌门(Rozellomycota)、厌氧粘细菌属(Anaeromyxobacter)和黑孢霉属(Nigrospora)相对丰度最低。与常规施肥相比,秸秆还田耦合菌剂各处理提高了土壤有机碳和水稻产量,增幅分别为27.38%~37.94%和7.97%~23.14%,以NPKSML8-18处理最高。相关性分析表明,土壤有机碳和水稻产量与易氧化有机碳、微生物生物量碳、矿物结合态有机碳、颗粒有机碳和β-1,4-木聚糖酶、α-1,4-葡萄糖苷酶、β-1,4-葡萄糖苷酶活性显著正相关(P<0.05),但与可溶性有机碳、细菌香农指数和真菌群落物种丰富度指数显著负相关(P<0.01)。【结论】秸秆深施耦合腐解菌剂(NPKSML8-18)可通过提升土壤易氧化有机碳、微生物生物量碳、矿物结合态有机碳和颗粒有机碳含量,增强β-1,4-木聚糖酶、α-1,4-葡萄糖苷酶和β-1,4-葡萄糖苷酶活性,提高促进秸秆分解的绿弯菌门(Chloroflexi)相对丰度,进而提高土壤有机碳含量和水稻产量。