中国水稻科学
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中国水稻科学  2006, Vol. 20 Issue (3): 231-237     DOI:
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农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体筛选
刘朋娟;王政逸*;王秋华;李德葆
浙江大学 农业与生物技术学院 生物技术研究所, 浙江 杭州 310029
Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation of Magnaporthe grisea and Identification of Pathogenicity Defective Mutant
LIU Peng-juan , WANG Zheng-yi , WANG Qiu-hua , LI De-bao
 全文: PDF (643 KB)   HTML (1 KB)   输出: BibTeX | EndNote (RIS)      背景资料
摘要 在构建了两个含有潮霉素B磷酸转移酶基因双元载体的基础上,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化,转化效率达每1×106个分生孢子>300个转化子,并得到了4000多个转化子。通过继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮霉素抗性基因可稳定遗传。Southern杂交分析表明,大约有2/3转化子的TDNA插入是单拷贝的。用大麦叶片离体接种的方法快速测定部分稻瘟病菌转化子的致病性,发现一个致病缺陷突变体:A1412。该突变体不能侵入水稻叶片及擦伤的大麦或水稻叶片,说明A1412突变体在寄主组织中扩展进程被阻断。进一步的表型分析发现A1412突变体的产孢量显著下降,仅为野生菌株的7%,在疏水表面不能形成附着胞,部分分生孢子萌发也略有延迟。Southern 杂交显示A1412基因组中TDNA插入是单拷贝的。上述结果表明,A1412突变体表型的改变可能是由于TDNA插入而使某一具有重要生物学功能的基因失活所致。
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刘朋娟
王政逸
王秋华
李德葆
关键词稻瘟病菌   根癌农杆菌介导转化   插入突变   致病缺陷突变体     
AbstractBased on the construction of two binary vectors containing hygromycin B, the use of Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation as a successful method for insertional mutagenesis in rice blast fungus Magnaporthe grisea was reported. A library including more than 4000 transformants with a high transformation efficiency of over 300 hygromycin B resistant transformants per 1×106 conidia of M. grisea was generated. All of the hygromycin B resistant transformants tested were mitotically stable after several subcultures onto complete medium without hygromycin. Genomic Southern blot analysis showed that about two thirds of the transformants were single T-DNA insertional events. Through testing pathogenicity of mutational transformants by a rapid barley leaf assay method, an interesting mutant, A1-412, which was completely nonpathogenic to both barley and rice and also lost the ability to undergo infectious growth through abraded leaves was identified. Phenotypic analysis showed that the mutant A1-412 was significantly reduced in conidiation only accounting for 7% conidia of the wild type strain, and was unable to form appressorium on hydrophobic surfaces and its germination was slightly delayed. Southern blot analysis showed that T-DNA inserted into the A1-412 genome was single copy. These data suggest that an important biological process blocked in A1-412 was likely to be due to the insertion of T-DNA and the subsequent disruption of gene function.
Key wordsMagnaporthe grisea   Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation   insertional mutagenesis   pathogenicity defective mutant   
收稿日期: 1900-01-01;
引用本文:   
刘朋娟,王政逸,王秋华等. 农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体筛选[J]. 中国水稻科学, 2006, 20(3): 231-237 .
LIU Peng-juan ,WANG Zheng-yi ,WANG Qiu-hua et al. Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation of Magnaporthe grisea and Identification of Pathogenicity Defective Mutant[J]. , 2006, 20(3): 231-237 .
 
没有本文参考文献
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